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鵝降鈣素(CT)ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)�(yàn)原理

2022�03�18�
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� � �上海研生生化試劑有限公司 需要積�0
�(guān) � �鵝降鈣素(CT)ELISA檢測(cè)試劑�,鵝降鈣素(CT)ELISA檢測(cè)試劑�,鵝降鈣素(CT)ELIS
【資料簡(jiǎn)介�

鵝降鈣素(CT)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

 

�(yōu)�(shì)�

1�抗體----高效、靈敏、特異性好

2、規(guī)范包被操�----吸附均勻、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

3、先�(jìn)的優(yōu)化方�----重復(fù)性高,可靠性強(qiáng)

4、高�(biāo)�(zhǔn)技�(shù)服務(wù)要求:靈敏度高,特異性強(qiáng) 

5、適用范圍廣:血漿、血清、組織勻漿液、細(xì)胞培�(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣�

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往�(yù)先包被組胺(HIS)抗體的包被微孔中,依次加入�(biāo)本、標(biāo)�(zhǔn)品、HRP�(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)�(guò)溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下�(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺(HIS)呈正相�(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度�

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作�(guò)程中避免任何�(xì)胞刺激,收集血液后�3000�(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000�(zhuǎn)離心30分鐘取上清�

3.  �(xì)胞上清液�3000�(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物�

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000�(zhuǎn)離心10分鐘取上清�

5.  保存:如果樣本收集后不及�(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存�-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

操作步驟


  從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�


  �(shè)置標(biāo)�(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)�(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)�(zhǔn)�50μL�


  樣本孔先加待�(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加�


  除空白孔外,�(biāo)�(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反�(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�


  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)�


  每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�


  每孔加入終止�50μL�15min�(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值�


�(jié)果判�


 繪制�(biāo)�(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以�(biāo)�(zhǔn)品濃度作橫坐�(biāo),對(duì)�(yīng)OD值作縱坐�(biāo),繪制出�(biāo)�(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值�


 



自備物品

酶標(biāo)儀�450nm�

高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL

37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平�20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液�(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)�*溶解后再使用�

  �(shí)�(yàn)中不用的板條�(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存�

  濃度�0的S0�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照�(shuō)明書操作�(shí)樣本已經(jīng)稀�5倍,終結(jié)果乘�5才是樣本�(shí)際濃度�

  �(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的�(shí)間、加液量及順序�(jìn)行溫育操作�

  所有液體組分使用前充分搖勻�

試劑盒組�

名稱96孔配�48孔配�備注

微孔酶標(biāo)�12孔�8�12孔�4��(wú)

�(biāo)�(zhǔn)�0.3mL*6�0.3mL*6��(wú)

樣本稀釋液6mL3mL�(wú)

檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL�(wú)

20×洗滌緩沖�25mL15mL按說(shuō)明書�(jìn)行稀�

底物A6mL3mL�(wú)

底物B6mL3mL�(wú)

終止�6mL3mL�(wú)

封板�2�2��(wú)

�(shuō)明書1�1��(wú)

自封�1�(gè)1�(gè)�(wú)

注:�(biāo)�(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為�0�12.5�25�50�100�200 mg/L

試劑的準(zhǔn)�

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水�

洗板方法

  手工洗板:甩盡孔�(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜�1min后甩盡孔�(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗�5次�

  自動(dòng)洗板�(jī):每孔注入洗�350μL,浸�1min,洗�5次�


試劑盒性能

 �(zhǔn)確性:�(biāo)�(zhǔn)品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900�

 靈敏度:低檢�(cè)濃度小于1.0 mg/L�

 特異性:不與其它可溶性結(jié)�(gòu)類似物交叉反�(yīng)�

 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�15%�

 貯藏�2-8℃,避光防潮保存�

 有效期:6�(gè)�

免責(zé)聲明

  試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床�(shí)�(yàn)或人體實(shí)�(yàn),否則所�(chǎn)生的一切后果,由實(shí)�(yàn)者承�(dān),本公司概不�(fù)�(zé)�

  �(yán)格按照說(shuō)明書操作,實(shí)�(yàn)者違反說(shuō)明書操作,后果由�(shí)�(yàn)者承�(dān)�

 

 

 

 



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